新冠病毒核酸１０合１混采檢測技術(shù)規(guī)范

為落實國務(wù)院應(yīng)對新冠病毒感染肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制《關(guān)于做好新冠肺炎疫情常態(tài)化防控工作的指導(dǎo)意見》（國發(fā)明電〔２０２０〕１４號）以及《關(guān)于加快推進新冠病毒核酸檢測的實施意見》（聯(lián)防聯(lián)控機制綜發(fā)﹝２０２０﹞１８１號）有關(guān)要求，指導(dǎo)各地新冠病毒混采檢測工作,，進一步提升核酸檢測能力和效率,，針對新冠病毒核酸１０合１混采檢測（１０－ｉｎ－１ｔｅｓｔ）技術(shù)（指將采集自１０人的１０支拭子集合于１個采集管中進行核酸檢測的方法），制定本規(guī)范,。

一,、樣本采集耗材規(guī)格

（一）病毒采樣管。管帽和管體應(yīng)當(dāng)為聚丙烯材質(zhì),，螺旋口可密封,，松緊適度。管體透明,，可視度好,。試管外徑（１４．８±０．２）ｍｍ×（１００．５±０．４）ｍｍ，管帽外徑（１５．８±０．１５）ｍｍ,，高度（１２．５±０．５）ｍｍ,。容量企業(yè)定標(biāo)１０ｍｌ，內(nèi)含６ｍｌ胍鹽或其他有效病毒滅活劑的保存液,。保存液應(yīng)當(dāng)帶有易于觀察,、辨識的顏色（如粉紅色），并保持一定的流動性,，方便取樣,。

（二）采樣拭子。宜選用聚酯,、尼龍等非棉質(zhì),、非藻酸鈣材質(zhì)的拭子，且柄部為非木質(zhì)材料,。折斷點位于距拭子頭頂端３ｃｍ左右,，易于折斷。

二,、采集地點要求

選擇空曠,、通風(fēng)良好的場地作為大規(guī)模人群篩查集中采集地點。根據(jù)原有場地條件,，劃分為等候區(qū),、采集區(qū)、緩沖區(qū)和臨時隔離區(qū),，有效分散待檢人員密度,。應(yīng)當(dāng)設(shè)置急救設(shè)備備用。

（一）等候區(qū),。設(shè)置人行通道,，同時設(shè)置一米線保證等候人員的防護安全。根據(jù)天氣條件配備保溫,、降溫,，遮陽,、遮雨等設(shè)施。老年人,、兒童,、孕婦和其他行動不便者優(yōu)先采集。

（二）采集區(qū),。根據(jù)氣候條件,，配備帳篷、冷／暖風(fēng)扇,、適量桌椅,，保證醫(yī)護人員在相對舒適環(huán)境下工作。配備采集用消毒用品,、拭子,、一次性病毒采樣管，并應(yīng)當(dāng)為受檢人員準(zhǔn)備紙巾,、嘔吐袋和口罩備用,。標(biāo)本如無法及時運送至實驗室，需準(zhǔn)備４℃冰箱或低溫保存箱暫存,。應(yīng)當(dāng)制定防止病原微生物擴散和感染的應(yīng)急預(yù)案,。

（三）緩沖區(qū)?？臻g應(yīng)當(dāng)相對密閉,，可供采集人員更換個人防護裝備，放置與采樣點規(guī)模相匹配的防護用品,、采集用消毒用品,、咽拭子和一次性使用病毒采樣管，戶外消殺設(shè)備,。

（四）臨時隔離區(qū),。用于暫時隔離在采集過程中發(fā)現(xiàn)的疑似患者或高危人群。

三,、采集流程

（一）標(biāo)識及信息登記,。１．登記流程。工作人員在采集前分配１０個受檢者為一組,，采集前收集并登記受檢者相關(guān)信息（包括姓名,、性別、身份證號,、聯(lián)系電話,、采集地點、采集日期和時間），按照組別進行病毒采集管編號,。２．登記要求,。推薦使用身份證讀卡器、二維碼條碼等信息化手段關(guān)聯(lián)受檢者信息,，提高信息讀取效率和準(zhǔn)確性,。如不具備信息化條件，應(yīng)當(dāng)提前登記《新冠病毒核酸１０合１混采檢測登記表》（以下簡稱混采登記表）,。紙質(zhì)登記表隨標(biāo)本送檢前應(yīng)當(dāng)備份存檔于采集點所在社區(qū)，便于及時追溯受檢者,。

（二）采集方法,。被采集人員頭部微仰，嘴張大,，發(fā)“啊”音,，露出兩側(cè)咽扁桃體，采集人員將拭子越過被采集人員舌根,，在兩側(cè)咽扁桃體稍微用力來回擦拭至少３次,，然后在咽后壁上下擦拭至少３次。操作完畢后,，將口咽拭子頭置入管中,、拭子折斷點置于管口處，稍用力折斷使拭子頭落入采集管的液體中,，棄去折斷后的拭子桿,，旋緊管蓋，將采集管置于穩(wěn)定的置物架上,。每例采集后采集人員均應(yīng)進行手消毒,。

（三）混合拭子。依照上述采集方法依次采集其余９支拭子,，將完成采集的拭子放入同一采集管中,，動作輕柔，避免氣溶膠產(chǎn)生,。連續(xù)采集１０支拭子以后,，旋緊管蓋，防止溢灑,。如病毒采集管內(nèi)拭子不足１０支,，應(yīng)做好特殊標(biāo)記并記錄。

四,、標(biāo)本送檢

（一）核對信息,。核對采集管標(biāo)簽與混采登記表信息，確保準(zhǔn)確完整，編號一致,。

（二）標(biāo)本放置要求,。將核對后的病毒采樣管放入透明塑料密封袋（一層容器）中并封嚴(yán)袋口，用７５％乙醇噴灑密封袋外部,。將密封袋放入二層容器（可選內(nèi)配適量吸濕材料的包裝盒或雙層醫(yī)用垃圾袋）,，密封后用７５％乙醇噴灑消毒。將二層容器放入具有“生物危害”標(biāo)識的專用標(biāo)本轉(zhuǎn)運箱（推薦使用符合《危險品航空安全運輸技術(shù)細則》Ａ類物品運輸ＵＮ２８１４標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)運箱）,，二層容器和轉(zhuǎn)運箱之間應(yīng)當(dāng)放置降溫凝膠冰袋,。二層容器應(yīng)當(dāng)固定在轉(zhuǎn)運箱中，保持標(biāo)本直立,。密封轉(zhuǎn)運箱后,，使用７５％乙醇噴灑消毒，轉(zhuǎn)運箱表面潔凈無污染,。

（三）標(biāo)本轉(zhuǎn)運要求,。標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)運箱應(yīng)當(dāng)由專門標(biāo)本運送人員負責(zé)運送。標(biāo)本應(yīng)當(dāng)在采集后２～４小時內(nèi)送至實驗室,?；觳傻怯洷矸湃氇毩⒚芊獯S轉(zhuǎn)運箱一同轉(zhuǎn)運,。不能立即送檢的,，應(yīng)當(dāng)配備專門的冰箱或冷藏箱保存，并做好標(biāo)本接收,、保存登記,。標(biāo)本采集后２４小時內(nèi)可置于４℃保存。

五,、實驗室接收

（一）標(biāo)本簽收,。運送和接收人員應(yīng)當(dāng)對標(biāo)本進行雙簽收。接收人員檢查混采登記表是否填寫完整,，被檢者信息是否可追溯,，轉(zhuǎn)運箱、二層容器有無破損,。

（二）標(biāo)本打開,。應(yīng)當(dāng)在生物安全二級實驗室核心區(qū)打開轉(zhuǎn)運箱，取出二層容器,。在生物安全柜中打開二層容器,，用７５％乙醇噴灑或擦拭消毒后，取出密封袋,，用７５％乙醇試劑噴灑或擦拭消毒,，并檢查是否密封完好。

（三）標(biāo)本檢查。核對采集管標(biāo)簽與混采登記表信息是否一致,。取出病毒采樣管,，檢查管壁是否有破損、管口滲漏等,，確認無破損,、滲漏后用７５％乙醇噴灑或擦拭消毒。如有破損,、滲漏,，應(yīng)當(dāng)立即停止操作，用吸水紙覆蓋后使用０．５５％含氯消毒劑進行消毒處理,，做好不合格登記后銷毀,。

（四）標(biāo)本保存。不能及時檢測的標(biāo)本放入專用冰箱保存,。２４小時內(nèi)檢測的標(biāo)本可置于４℃保存。２４小時內(nèi)無法檢測的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)置于－７０℃或以下溫度保存,。如無－７０℃保存條件,，則于－２０℃暫存。避免標(biāo)本反復(fù)凍融,。設(shè)立專庫或?qū)９癖４鏄?biāo)本,，雙人雙鎖管理。

（五）轉(zhuǎn)運容器移出,。使用后的二層容器內(nèi)外壁經(jīng)７５％乙醇擦拭消毒后移出生物安全柜,，實驗結(jié)束后使用紫外燈照射消毒。

六,、標(biāo)本檢測與質(zhì)量控制

（一）標(biāo)本檢測,。實驗室接收標(biāo)本后，應(yīng)當(dāng)立即進行檢測,。檢測前進行充分震蕩洗脫,，之后進行核酸提取及擴增實驗。推薦選用包含針對新冠病毒開放讀碼框１ａｂ（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ１ａｂ,，ＯＲＦ１ａｂ）和核殼蛋白（ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎ，Ｎ）基因區(qū)域的試劑,。若使用核酸提取儀，核酸提取試劑應(yīng)與核酸提取儀配套使用,。擴增試劑盒應(yīng)當(dāng)選用國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)帶有注冊文號的試劑盒,。建議選擇檢測限低、靈敏度高的檢測試劑盒。

（二）檢測質(zhì)控,。每批檢測至少有１份弱陽性質(zhì)控品（第三方質(zhì)控品,，通常為檢出限的３倍左右）、２份陰性質(zhì)控品（試劑盒自帶陰性質(zhì)控品）和１份空白對照品（生理鹽水或焦碳酸二乙酯處理水）,?？瞻讓φ掌窇?yīng)當(dāng)開蓋放置在提取儀或操作臺面上過夜，用于環(huán)境污染評估,。質(zhì)控品隨機放在臨床標(biāo)本中,，參與從提取到擴增的全過程。

（三）質(zhì)控結(jié)果,。弱陽性質(zhì)控品測定為陽性,，陰性質(zhì)控品全部測定為陰性，視為在控,。反之,，則為失控，不可出具檢測報告,，應(yīng)立即分析原因,，必要時重新檢測標(biāo)本。

七,、檢驗結(jié)果處理

新冠病毒核酸定性檢測報告應(yīng)當(dāng)包括檢測結(jié)果（檢出／陽性,、未檢出／陰性）、方法學(xué),、檢出限等,。

（一）結(jié)果判斷。依據(jù)所用擴增試劑說明書,，判斷檢測結(jié)果為未檢出／陰性或者檢出／陽性,。若結(jié)果處于灰區(qū)，建議作為混采陽性結(jié)果進行復(fù)核,。

（二）陽性結(jié)果復(fù)核,。１．混采檢測結(jié)果為陽性、灰區(qū)或單個靶標(biāo)陽性,，通知相關(guān)部門對該混采管的１０個受試者暫時單獨隔離,，并重新采集單管拭子進行復(fù)核。２．復(fù)核單管核酸檢測如均為陰性,，則按照陰性結(jié)果回報,。暫時隔離人員即解除隔離；如檢測結(jié)果陽性,，按程序上報,。

八,、檢測后樣本處理

檢測后的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)盡快就地銷毀，做好高壓滅菌質(zhì)量監(jiān)控和消毒,、銷毀記錄,。

九、技術(shù)人員基本要求

采樣人員和檢測人員要求應(yīng)滿足《醫(yī)療機構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行）》要求,。

十,、生物安全防護

（一）標(biāo)本采集和運送人員。對于采集低風(fēng)險區(qū)域人群的采集者,，采用二級生物安全防護,。包括：一次性帽子、醫(yī)用防護口罩（Ｎ９５）,、手套（必要時雙層）,、護目鏡／面屏、隔離衣,，鞋套（必要時）,。標(biāo)本運送人員采用一級生物安全防護，包括：醫(yī)用外科口罩,、乳膠手套,、工作服，可戴醫(yī)用防護帽,。

（二）標(biāo)本接收和檢測人員,。標(biāo)本接收人員應(yīng)當(dāng)為核酸檢測實驗室經(jīng)生物安全防護培訓(xùn)的指定人員,，采用二級以上生物安全防護。生物安全防護標(biāo)準(zhǔn)可根據(jù)所從事工作的危險性進行區(qū)分,。進行試劑準(zhǔn)備和核酸擴增的工作人員采用二級防護。處理標(biāo)本的人員必須嚴(yán)格遵照三級防護標(biāo)準(zhǔn),，包括：醫(yī)用防護口罩或Ｎ９５,、單或雙層乳膠手套（條件許可，可以不同顏色）,、面屏,、護目鏡、工作服外防護服,、單或雙層醫(yī)用防護帽,，手衛(wèi)生。必要時雙層口罩（外醫(yī)用防護口罩,，內(nèi)Ｎ９５）,。