新冠病毒核酸１０合１混采檢測技術規(guī)范

為落實國務院應對新冠病毒感染肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制《關于做好新冠肺炎疫情常態(tài)化防控工作的指導意見》（國發(fā)明電〔２０２０〕１４號）以及《關于加快推進新冠病毒核酸檢測的實施意見》（聯(lián)防聯(lián)控機制綜發(fā)﹝２０２０﹞１８１號）有關要求,，指導各地新冠病毒混采檢測工作,，進一步提升核酸檢測能力和效率，針對新冠病毒核酸１０合１混采檢測（１０－ｉｎ－１ｔｅｓｔ）技術（指將采集自１０人的１０支拭子集合于１個采集管中進行核酸檢測的方法）,，制定本規(guī)范,。

一,、樣本采集耗材規(guī)格

（一）病毒采樣管。管帽和管體應當為聚丙烯材質,，螺旋口可密封,，松緊適度。管體透明,，可視度好,。試管外徑（１４．８±０．２）ｍｍ×（１００．５±０．４）ｍｍ,，管帽外徑（１５．８±０．１５）ｍｍ,，高度（１２．５±０．５）ｍｍ。容量企業(yè)定標１０ｍｌ,，內含６ｍｌ胍鹽或其他有效病毒滅活劑的保存液,。保存液應當帶有易于觀察、辨識的顏色（如粉紅色）,，并保持一定的流動性,，方便取樣。

（二）采樣拭子,。宜選用聚酯,、尼龍等非棉質、非藻酸鈣材質的拭子,，且柄部為非木質材料,。折斷點位于距拭子頭頂端３ｃｍ左右，易于折斷,。

二,、采集地點要求

選擇空曠,、通風良好的場地作為大規(guī)模人群篩查集中采集地點。根據(jù)原有場地條件,，劃分為等候區(qū),、采集區(qū)、緩沖區(qū)和臨時隔離區(qū),，有效分散待檢人員密度,。應當設置急救設備備用。

（一）等候區(qū),。設置人行通道,，同時設置一米線保證等候人員的防護安全。根據(jù)天氣條件配備保溫,、降溫,，遮陽、遮雨等設施,。老年人,、兒童、孕婦和其他行動不便者優(yōu)先采集,。

（二）采集區(qū),。根據(jù)氣候條件，配備帳篷,、冷／暖風扇,、適量桌椅，保證醫(yī)護人員在相對舒適環(huán)境下工作,。配備采集用消毒用品,、拭子、一次性病毒采樣管,，并應當為受檢人員準備紙巾,、嘔吐袋和口罩備用。標本如無法及時運送至實驗室,，需準備４℃冰箱或低溫保存箱暫存,。應當制定防止病原微生物擴散和感染的應急預案。

（三）緩沖區(qū),?？臻g應當相對密閉，可供采集人員更換個人防護裝備,，放置與采樣點規(guī)模相匹配的防護用品,、采集用消毒用品、咽拭子和一次性使用病毒采樣管,，戶外消殺設備,。

（四）臨時隔離區(qū),。用于暫時隔離在采集過程中發(fā)現(xiàn)的疑似患者或高危人群。

三,、采集流程

（一）標識及信息登記,。１．登記流程。工作人員在采集前分配１０個受檢者為一組,，采集前收集并登記受檢者相關信息（包括姓名,、性別、身份證號,、聯(lián)系電話,、采集地點、采集日期和時間）,，按照組別進行病毒采集管編號,。２．登記要求。推薦使用身份證讀卡器,、二維碼條碼等信息化手段關聯(lián)受檢者信息,，提高信息讀取效率和準確性。如不具備信息化條件,，應當提前登記《新冠病毒核酸１０合１混采檢測登記表》（以下簡稱混采登記表）,。紙質登記表隨標本送檢前應當備份存檔于采集點所在社區(qū)，便于及時追溯受檢者,。

（二）采集方法,。被采集人員頭部微仰，嘴張大,，發(fā)“啊”音,，露出兩側咽扁桃體，采集人員將拭子越過被采集人員舌根,，在兩側咽扁桃體稍微用力來回擦拭至少３次,，然后在咽后壁上下擦拭至少３次。操作完畢后,，將口咽拭子頭置入管中、拭子折斷點置于管口處,，稍用力折斷使拭子頭落入采集管的液體中,，棄去折斷后的拭子桿，旋緊管蓋,，將采集管置于穩(wěn)定的置物架上,。每例采集后采集人員均應進行手消毒。

（三）混合拭子,。依照上述采集方法依次采集其余９支拭子,，將完成采集的拭子放入同一采集管中,，動作輕柔，避免氣溶膠產(chǎn)生,。連續(xù)采集１０支拭子以后,，旋緊管蓋，防止溢灑,。如病毒采集管內拭子不足１０支,，應做好特殊標記并記錄。

四,、標本送檢

（一）核對信息,。核對采集管標簽與混采登記表信息，確保準確完整,，編號一致,。

（二）標本放置要求。將核對后的病毒采樣管放入透明塑料密封袋（一層容器）中并封嚴袋口,，用７５％乙醇噴灑密封袋外部,。將密封袋放入二層容器（可選內配適量吸濕材料的包裝盒或雙層醫(yī)用垃圾袋），密封后用７５％乙醇噴灑消毒,。將二層容器放入具有“生物危害”標識的專用標本轉運箱（推薦使用符合《危險品航空安全運輸技術細則》Ａ類物品運輸ＵＮ２８１４標準的轉運箱）,，二層容器和轉運箱之間應當放置降溫凝膠冰袋。二層容器應當固定在轉運箱中,，保持標本直立,。密封轉運箱后，使用７５％乙醇噴灑消毒,，轉運箱表面潔凈無污染,。

（三）標本轉運要求。標準轉運箱應當由專門標本運送人員負責運送,。標本應當在采集后２～４小時內送至實驗室,。混采登記表放入獨立密封袋,，隨轉運箱一同轉運,。不能立即送檢的，應當配備專門的冰箱或冷藏箱保存,，并做好標本接收,、保存登記。標本采集后２４小時內可置于４℃保存,。

五,、實驗室接收

（一）標本簽收。運送和接收人員應當對標本進行雙簽收。接收人員檢查混采登記表是否填寫完整,，被檢者信息是否可追溯,，轉運箱、二層容器有無破損,。

（二）標本打開,。應當在生物安全二級實驗室核心區(qū)打開轉運箱，取出二層容器,。在生物安全柜中打開二層容器,，用７５％乙醇噴灑或擦拭消毒后，取出密封袋,，用７５％乙醇試劑噴灑或擦拭消毒,，并檢查是否密封完好。

（三）標本檢查,。核對采集管標簽與混采登記表信息是否一致,。取出病毒采樣管，檢查管壁是否有破損,、管口滲漏等,，確認無破損、滲漏后用７５％乙醇噴灑或擦拭消毒,。如有破損,、滲漏，應當立即停止操作,，用吸水紙覆蓋后使用０．５５％含氯消毒劑進行消毒處理,，做好不合格登記后銷毀。

（四）標本保存,。不能及時檢測的標本放入專用冰箱保存,。２４小時內檢測的標本可置于４℃保存。２４小時內無法檢測的標本應當置于－７０℃或以下溫度保存,。如無－７０℃保存條件,，則于－２０℃暫存。避免標本反復凍融,。設立專庫或專柜保存標本,，雙人雙鎖管理。

（五）轉運容器移出,。使用后的二層容器內外壁經(jīng)７５％乙醇擦拭消毒后移出生物安全柜,，實驗結束后使用紫外燈照射消毒。

六,、標本檢測與質量控制

（一）標本檢測。實驗室接收標本后，應當立即進行檢測,。檢測前進行充分震蕩洗脫,，之后進行核酸提取及擴增實驗。推薦選用包含針對新冠病毒開放讀碼框１ａｂ（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ１ａｂ,，ＯＲＦ１ａｂ）和核殼蛋白（ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎ,，Ｎ）基因區(qū)域的試劑。若使用核酸提取儀,，核酸提取試劑應與核酸提取儀配套使用,。擴增試劑盒應當選用國家藥品監(jiān)督管理局批準帶有注冊文號的試劑盒。建議選擇檢測限低,、靈敏度高的檢測試劑盒,。

（二）檢測質控。每批檢測至少有１份弱陽性質控品（第三方質控品,，通常為檢出限的３倍左右）,、２份陰性質控品（試劑盒自帶陰性質控品）和１份空白對照品（生理鹽水或焦碳酸二乙酯處理水）?？瞻讓φ掌窇旈_蓋放置在提取儀或操作臺面上過夜,，用于環(huán)境污染評估。質控品隨機放在臨床標本中,，參與從提取到擴增的全過程,。

（三）質控結果。弱陽性質控品測定為陽性,，陰性質控品全部測定為陰性,，視為在控。反之,，則為失控,，不可出具檢測報告，應立即分析原因,，必要時重新檢測標本,。

七、檢驗結果處理

新冠病毒核酸定性檢測報告應當包括檢測結果（檢出／陽性,、未檢出／陰性）,、方法學、檢出限等,。

（一）結果判斷,。依據(jù)所用擴增試劑說明書，判斷檢測結果為未檢出／陰性或者檢出／陽性,。若結果處于灰區(qū),，建議作為混采陽性結果進行復核,。

（二）陽性結果復核。１．混采檢測結果為陽性,、灰區(qū)或單個靶標陽性,，通知相關部門對該混采管的１０個受試者暫時單獨隔離，并重新采集單管拭子進行復核,。２．復核單管核酸檢測如均為陰性,，則按照陰性結果回報。暫時隔離人員即解除隔離,；如檢測結果陽性,，按程序上報。

八,、檢測后樣本處理

檢測后的標本應當盡快就地銷毀,，做好高壓滅菌質量監(jiān)控和消毒、銷毀記錄,。

九,、技術人員基本要求

采樣人員和檢測人員要求應滿足《醫(yī)療機構新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行）》要求。

十,、生物安全防護

（一）標本采集和運送人員,。對于采集低風險區(qū)域人群的采集者，采用二級生物安全防護,。包括：一次性帽子,、醫(yī)用防護口罩（Ｎ９５）、手套（必要時雙層）,、護目鏡／面屏,、隔離衣，鞋套（必要時）,。標本運送人員采用一級生物安全防護,，包括：醫(yī)用外科口罩、乳膠手套,、工作服,，可戴醫(yī)用防護帽。

（二）標本接收和檢測人員,。標本接收人員應當為核酸檢測實驗室經(jīng)生物安全防護培訓的指定人員,，采用二級以上生物安全防護。生物安全防護標準可根據(jù)所從事工作的危險性進行區(qū)分,。進行試劑準備和核酸擴增的工作人員采用二級防護,。處理標本的人員必須嚴格遵照三級防護標準，包括：醫(yī)用防護口罩或Ｎ９５,、單或雙層乳膠手套（條件許可,，可以不同顏色）,、面屏、護目鏡,、工作服外防護服,、單或雙層醫(yī)用防護帽,，手衛(wèi)生,。必要時雙層口罩（外醫(yī)用防護口罩，內Ｎ９５）,。